DB54∕T 0411-2024 青稞及其制品中5种黄铜类化合物的测定高效液相色谱法(西藏自治区)
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0.15 |
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6 |
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日期： |
2024/10/20 |
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ICS 67.050,CCS B 04 54,西藏自治区地方标准,DB54/T 0411—2024,青稞及其制品中5 种黄酮类化合物的测定,高效液相色谱法,2024-09-15 发布2024-10-15 实施,西藏自治区市场监督管理局 发布,DB54/T 0411—2024,I,前言,本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定,起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任,本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口,本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院农业质量标准与检测研究所、西藏自治区农畜产品工程技,术研究中心、拉萨海关技术中心、南阳理工学院,本文件主要起草人：代艳娜、魏娜、潘虎、蒲继锋、王军、王君,DB54/T 0411—2024,1,青稞及其制品中5 种黄酮类化合物的测定,高效液相色谱法,1 范围,本文件规定了青稞及其制品中芦丁、儿茶素、杨梅素、槲皮素、山奈酚高效液相色谱测定方法的试,样制备、分析步骤、结果计算、检出限、定量限和精密度,本文件适用于青稞、糌粑、青稞米中芦丁、儿茶素、杨梅素、槲皮素、山奈酚 5 种黄酮类化合物,含量的测定,2 规范性引用文件,下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本,文件,GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法,3 方法原理,试样用75 %甲醇溶液超声提取后，经C18色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，根据,保留时间定性和外标法定量,4 试剂与材料,4.1 试剂,4.1.1 甲醇：色谱纯,4.1.2 甲酸：色谱纯,4.1.3 乙腈：色谱纯,4.1.4 75 %甲醇-水溶液（V/V）：取甲醇750 mL，用超纯水稀释至1000 mL，混匀,4.1.5 0.1 %甲酸-水溶液（V/V）：取甲酸1 mL，用超纯水稀释至1 000 mL,4.1.6 0.1 %甲酸-乙腈溶液（V/V）：取甲酸1 mL，用乙腈稀释至1 000 mL,4.1.7 检测用水应符合GB/T 6682 一级水的规定,4.2 标准品,芦丁标准品（C27H30O16，CAS号：153-18-4）、儿茶素标准品（C15H14O6，CAS号：154-23-4）、,杨梅素标准品（C15H10O8，CAS号：529-44-2）、槲皮素标准品（C15H10O7，CAS号：117-39-5）、山奈,酚标准品（C15H10O6，CAS号：520-18-3）纯度 ≥ 98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物,质,4.3 标准溶液配制,DB54/T 0411—2024,2,4.3.1 标准储备溶液：分别准确称取儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚标准品各5.0 mg，用甲,醇溶液配置成500 mg/L 的单标储备液，于-18 ℃避光保存,4.3.2 标准工作溶液：分别吸取适量的标准储备液，用75 %甲醇稀释成儿茶素浓度为：12 mg/L、20 mg/L、,30 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L；芦丁、杨梅素、槲皮素及山奈酚浓度为2 mg/L、,4 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L 的混合标准工作溶液,5 仪器和设备,5.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器,5.2 分析天平：感量 0.001 g,5.3 涡旋振荡器,5.4 超声波萃取仪,5.5 低温冰箱：温度为-18 ℃以下,5.6 离心机：转速为6 000 r/min ± 50 r/min,5.7 微孔滤膜：0.22 μm，有机系,6 试样制备,取适量待测样品，用组织捣碎机将其粉碎成粉末状并充分混匀，用密封袋密封后放置于干燥皿中备,用,7 分析步骤,7.1 提取,称取试样2.00 g（±0.01g），于50 mL塑料离心管中，加75%甲醇溶液10 mL，涡旋混匀后超声提取90,min，于6 000 r/min离心5 min，取适量上清液过0.22 μm滤膜，待高效液相色谱测定,7.2 液相色谱参考条件,a) 色谱柱：C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），或相当者；,b) 流动相：A 为水相：0.1%甲酸，B 为有机相：0.1%甲酸-乙腈；,c) 流速：1.0 mL/min；,d) 柱温：30 ℃；,e) 进样量：10 μL；,f) 检测波长：270 nm,流动相梯度洗脱程序见表1：,表1 梯度洗脱程序,时间（min） A（%） B（%）,0 95 5,5 82 18,9 22 78,10 40 60,DB54/T 0411—2024,3,时间（min） A（%） B（%）,11 40 60,13 95 5,15 95 5,7.3 标准工作曲线的制作,取适量标准工作溶液，按照7.2规定的色谱条件测定，以标准溶液质量浓度为横坐标，对应的峰面,积为纵坐标，建立标准工作曲线。5种黄酮类化合物标准溶液色谱图见附录A,7.4 样品溶液测定,将7.1制备的样品溶液进行高效液相色谱仪分析，待测试样溶液中儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素,和山奈酚的响应值应在仪器线性相应范围内。以标准溶液色谱峰的保留时间定性，以标准溶液色谱峰峰,面积和试样峰峰面积比较定量，由标准工作曲线查得试样溶液中儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素和山奈,酚的浓度,8 结果计算,试样中各组分（儿茶素、芦……
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